Una volta sterilizzati i cereali in barattoli o buste è necessario inocularli con il micelio fungino. Ci sono diverse possibilità per gli inoculanti:

• Soluzione di spore - può funzionare, ma sconsigliata. I funghi da cui sono state raccolte crescono in un ambiente inevitabilmente non sterile ed è facile che presentino contaminanti (motivo per cui consiglio sempre l'utilizzo dell'agar per chi vuole coltivare in bulk)
• Agar - si inocula con un pezzo di agar su cui è stato coltivato micelio pulito
• Coltura liquida (LC) - essenzialmente l'agar senza agar agar, quindi un brodo nutriente colonizzato dal micelio. Decisamente sconsigliata a coltivatori alle prime armi in quanto molto soggetta a contaminanti se non preparata a dovere, la coltura liquida offre alta velocità di colonizzazione e inoculante pressoché infinito
• Inoculante liquido (LI) - preparato generalmente a partire dall'agar secondo diversi metodi, personalmente non lo amo. Consiste in una sospensione di micelio che viene ottenuta frullando l'agar colonizzato o “lavandolo” con dell'acqua sterile che viene poi aspirata con una siringa
• G2G (Grain to grain) - Un barattolo di cereali completamente colonizzati viene agitato per separare i grani e viene versato in altri barattoli non colonizzati all'interno della SAB. La velocità di colonizzazione è alta dopo il trasferimento, è un metodo che consiglio

Premesso che almeno all'inizio sconsiglio la coltura liquida a chi è alle prime armi, nasce il problema: come inoculare da una o due piastre di Petri con micelio una decina di barattoli o più? Le opzioni sono due: espandere il micelio a più piastre di agar (ogni piastra è sufficiente a inoculare 3/4 barattoli) o inoculare uno o due barattoli di grandi dimensioni (master jar) con l'agar disponibile e a colonizzazione completata utilizzarli per inoculare altri barattoli più piccoli. Entrambe le operazioni vanno effettuate all'interno della SAB o sotto cappa, e sono abbastanza lineari, è sufficiente rimuovere il coperchio, introdurre l'inoculante e richiudere. Per coperchi molto fini sigillare il bordo con i soliti rotolini di pellicola. Per il G2G è necessario agitare i barattoli per separare i vari grani colonizzati prima di effettuare il trasferimento. In caso siano stati utilizzati cereali di piccola dimensione come il miglio, può risultare difficile separare i grani a colonizzazione completa. Consiglio in questo caso di inoculare con agar oppure preparare le master jars con grani più grandi (segale ad esempio), e usare i cereali più piccoli per il resto (se più economici ad esempio).

Spesso mi viene chiesto se è necessario modificare i coperchi con dei filtri in silicone per l'iniezione dell'inoculante. Non è assolutamente necessario nella maggior parte dei casi, e svitare il coperchio, se fatto con buona tecnica sterile, ha meno possibilità di contaminazione dell'iniezione.

Durante la colonizzazione, il micelio ricoprirà l'intero barattolo, che diventerà bianco. Colori diversi dal bianco sono indice di contaminazione, e in tal caso è necessario buttare lo spawn. Utilizzare spawn contaminato garantirà una contaminazione del substrato finale e un raccolto scarso o nullo. Meglio buttare un barattolo che doverne buttare 5 quando la contaminazione dovesse spargersi anche agli altri una volta mischiati. A circa 30% di colonizzazione è fondamentale agitare con forza i barattoli (o le buste) per separare l'uno dall'altro i chicchi colonizzati e ridistribuirli. In questo modo, da una singola origine di colonizzazione (il pezzo di agar) si otterranno diversi punti da cui crescerà il micelio (uno per ogni chicco) sparsi all'interno del barattolo. La colonizzazione viene accelerata in questo modo. Non spaventatevi se dopo aver agitato il bianco del micelio scompare, è perfettamente normale e nel giro di un paio di giorni lo vedrete ricomparire dappertutto e colonizzare l'intero barattolo in breve tempo. La temperatura di colonizzazione ideale si aggira intorno ai 25 gradi, ma non è un problema generalmente. L'importante è non scendere sotto i 20 °C o salire sopra i 30 °C.

COLTIVAZIONE - Dove iniziare
COLTIVAZIONE - L'agar
COLTIVAZIONE - Bulk: fruttificazione
COLTIVAZIONE - PFTek

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